細(xì)胞培養(yǎng)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)，為我們提供了研究和理解細(xì)胞行為的關(guān)鍵工具。在細(xì)胞培養(yǎng)的廣泛應(yīng)用中，原代細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)重要的技術(shù)，允許科學(xué)家們從組織中獲取原始的、未經(jīng)過傳代的細(xì)胞，這一過程擴(kuò)展了我們對生命科學(xué)的認(rèn)知。

細(xì)胞培養(yǎng)——原代培養(yǎng)是指使用從組織或器官中直接分離的原始細(xì)胞，沒有經(jīng)過連續(xù)傳代。這種培養(yǎng)會因?yàn)榧?xì)胞的不斷生長繁殖，導(dǎo)致空間、營養(yǎng)物質(zhì)、代謝廢物的積累等細(xì)胞生長條件變差，使得細(xì)胞生長緩慢，甚至死亡，所以只能維持有限的時(shí)間。

原代培養(yǎng)的核心便是從活體組織中分離并培養(yǎng)細(xì)胞，因此我們需掌握原代培養(yǎng)的操作步驟。

一、取材

對于不同的組織，有著對應(yīng)的取材方式，操作過程中應(yīng)確保材料新鮮，使用鋒利的器械以盡可能減少機(jī)械損傷，并且操作環(huán)境要嚴(yán)格無菌。

腫瘤取材需避開壞死、液化的區(qū)域并盡可能于腫瘤細(xì)胞多的地方取材；皮膚、黏膜取2-3m㎡；取血細(xì)胞、羊水細(xì)胞、骨髓細(xì)胞等時(shí)需注意抗凝。

二、分離

因樣品多種細(xì)胞緊密結(jié)合，不適宜在體外生長繁殖，故必須將樣品組織充分散開，將細(xì)胞解離開，才能得到適合體外環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞。根據(jù)組織類型的不同我們選取不同的分離方法，如血液、胸水、腹水等細(xì)胞懸液多采用離心分離，其他實(shí)體組織材料分離采取機(jī)械分散法、剪切分離法、消化分離法等，如：皮膚、黏膜、內(nèi)臟、腫瘤等。

1. 細(xì)胞懸液分離

血液、羊水、胸水等細(xì)胞懸液，一般采用500-1000r/min的低速離心5-10分鐘（根據(jù)不同的細(xì)胞可調(diào)整轉(zhuǎn)速與離心時(shí)間），避免轉(zhuǎn)速過高、時(shí)間過長、以避免機(jī)械損傷細(xì)胞。因離心后由于各種細(xì)胞的比重不同，故在分層液中形成不同層，如此可根據(jù)需求選擇分液層，以得到理想的細(xì)胞。

2. 實(shí)體組織材料分離

A. 機(jī)械分散法：一些軟組織可剪刀剪切、吸管吹打分散細(xì)胞；或?qū)⒊浞旨羲榈慕M織放于注射器中，通過九號針頭壓等方法。此方法雖快速，但機(jī)械損傷大，分離效果差。

B. 剪切分離法：將組織剪成糊狀，加入營養(yǎng)液反復(fù)捶打，再低速離心棄上清即可。

C. 消化分離法

（a）酶消化法：常用胰蛋白酶、膠原酶。將組織放入酶溶液后，水浴加熱，過濾離心棄上清，重懸接種。

（b）非酶消化法：常用EDTA（又稱螯合劑，全名乙烯二胺四乙酸）進(jìn)行處理。

三、培養(yǎng)

原代培養(yǎng)分為組織快速培養(yǎng)法、消化培養(yǎng)法、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法、3D細(xì)胞培養(yǎng)、類器官培養(yǎng)。前兩種方法簡單高效，而3D細(xì)胞培養(yǎng)與類器官培養(yǎng)，其培養(yǎng)環(huán)境更接近人體內(nèi)，培養(yǎng)環(huán)境更加真實(shí)，可適用于高通量藥物篩選，在探索藥物、醫(yī)療、癌癥等方向極具前景。將分離的細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶，放于37°C CO2恒溫培養(yǎng)箱中即可。

細(xì)胞培養(yǎng)——原代培養(yǎng)提供了研究生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵起點(diǎn)，為科學(xué)家們深入了解生命過程和疾病機(jī)制提供了寶貴的機(jī)會。改進(jìn)、深究細(xì)胞培養(yǎng)——原代培養(yǎng)能使我們在藥物研究、醫(yī)學(xué)探索、癌癥治愈等道路上走的更加扎實(shí)、迅捷。

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