細胞培養(yǎng)（細胞克隆技術），是一種在人為創(chuàng)造的與體內環(huán)境相似的條件下（無菌*、溫度和ph適宜、營養(yǎng)條件良好），培養(yǎng)和維持生物細胞的生長和增殖的技術。而傳代培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)中的一項關鍵步驟，它涉及將已培養(yǎng)的細胞從一個培養(yǎng)皿或容器中分離出來，并將它們重新種植到新的培養(yǎng)皿或容器中，以繼續(xù)細胞的生長和擴增。傳代培養(yǎng)有助于保持細胞的健康狀態(tài)、增加細胞數(shù)量以提供大量可用于實驗的細胞。

細胞培養(yǎng)——傳代培養(yǎng)根據(jù)細胞種類不同一般可分為貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)兩大類型。

一、貼壁培養(yǎng)

貼壁培養(yǎng)一般是指貼壁依賴型細胞附著在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的底部，以在表面附著生長。這種培養(yǎng)方法廣泛應用于生物醫(yī)學研究和生產中，尤其是在體外細胞研究和藥物開發(fā)領域。

貼壁培養(yǎng)操作步驟：

1. 傳代前觀察細胞形態(tài)與密度，細胞生長密度為80%-90%時，適宜傳代。

2. 棄掉培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次。

3. 加入可覆蓋整個培養(yǎng)瓶底的含EDTA的胰蛋白酶。

4. 將培養(yǎng)瓶放進37°C恒溫CO2培養(yǎng)箱中，2-5分鐘后于顯微鏡下觀察，當70%-80*細胞收縮，間隙變大后，輕輕拍打培養(yǎng)瓶后加入培養(yǎng)液中止消化（2倍胰蛋白量），混合均勻以免消化過度。

5. 將細胞懸液以1000rpm/min離心3~5min。（根據(jù)細胞種類的不同，可調整轉速和時間）

6. 丟棄上清液，重懸細胞，輕晃拍打，使細胞均勻。

7. 取適量細胞懸液，重新接種，搖勻放于37°C恒溫CO2培養(yǎng)箱。

8. 觀察細胞生長狀態(tài)，以進行換液、傳代。

二、懸液培養(yǎng)

懸浮培養(yǎng)是指細胞在受到不斷攪動或搖動的液體培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)生長，而不是附著在培養(yǎng)器具的表面上。這種培養(yǎng)方法適用于許多不附著于固體表面的細胞類型，如血液細胞、淋巴細胞、某些腫瘤細胞等。

懸液培養(yǎng)操作步驟：

1. 直接傳代

立起細胞瓶，使細胞沉降，吸取1/2-2/3上清去掉，再重懸細胞，接種至新培養(yǎng)瓶中，搖勻，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2. 離心傳代法

將細胞懸液以1000rpm/min離心3~5min，棄除上清液，重懸細胞，搖勻，將適量懸液接種之新培養(yǎng)瓶中，補足營養(yǎng)液，搖勻，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)——傳代培養(yǎng)維持細胞生長、獲得大量用于實驗的細胞，確保實驗結果的可靠性，是科研中極為重要的一環(huán)。

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